一、校准依据与周期

校准依据
需遵循国家计量技术规范（如《聚合酶链反应（PCR）分析系统校准规范》JJF 1829-2020）、设备制造商提供的《宏石 96S 操作与维护手册》，以及实验室内部质量控制（QC）标准。

校准周期

1. 常规校准：建议每 12 个月进行一次全面校准；

2. 临时校准：设备搬运、维修后（如更换光学模块、温控模块）、检测结果异常或质控失败时，需立即校准。

二、核心校准项目及要求

1. 温控系统校准

· 校准内容：

· 加热块平均温度偏差（目标温度与实际温度的差值）；

· 温度均一性（加热块不同孔位间的温度差异）；

· 升降温速率（达到设定升温 / 降温斜率的准确性）。

· 校准工具：经计量认证的热电偶温度计、温度验证仪（如 FLUKE、ELLAB 系列）。

· 合格标准：

· 平均温度偏差≤±0.5℃（37℃、55℃、95℃等常用温度点）；

· 温度均一性≤±0.5℃；

· 升降温速率偏差不超过设定值的 ±10%。

2. 光学检测系统校准

· 校准内容：

· 基线荧光强度（无模板时的背景荧光稳定性）；

· 荧光通道灵敏度（对已知浓度标准品的检测线性范围）；

· 通道间干扰（不同荧光通道间的信号串扰程度）。

· 校准工具：原厂配套荧光校准板、梯度浓度标准品（如 ROX、FAM 标记的核酸片段）。

· 合格标准：

· 基线荧光变异系数（CV）≤5%；

· 标准品检测的线性相关系数（R²）≥0.99；

· 通道间干扰率≤3%。

3. 机械臂与加样系统校准（针对全自动机型）

· 校准内容：

· 机械臂定位精度（移液针在孔板内的对位准确性）；

· 加样体积准确性与重复性（对 1-1000μL 范围内的移液误差检测）。

· 校准工具：电子天平（精度 0.1mg）、校准用 96 孔板、有色染料溶液（如溴甲酚绿）。

· 合格标准：

· 定位偏差≤±0.5mm；

· 加样体积误差≤±5%，CV≤2%（不同体积档位均需检测）。

三、校准操作流程

前期准备

· 确认设备处于正常运行状态，开机预热 30 分钟以上；

· 清洁加热块、光学检测窗口及机械臂轨道，避免污染物影响校准；

· 检查校准工具的计量证书在有效期内，记录设备型号、序列号及当前软件版本。

分步校准操作

· 温控校准：

将热电偶探头固定在加热块的中心及四角孔位（共 5 点）；

设定目标温度（如 37℃、55℃、95℃），待温度稳定后记录各点实际温度，计算偏差和均一性；

测试升降温速率时，记录从初始温度到目标温度的时间，与设定斜率对比。

· 光学校准：

插入荧光校准板，运行设备自带的 “光学校准程序”，记录各通道基线荧光值；

加载梯度浓度标准品，执行检测程序，生成标准曲线，验证线性范围和灵敏度。

· 机械臂与加样校准：

通过设备校准菜单进入 “机械臂定位校准”，根据提示调整 X/Y 轴坐标，确保移液针对位准确；

用校准液进行多次移液（如 10 次 50μL），通过天平称重计算体积误差和 CV 值，超出范围时调整移液器参数。

数据记录与校准报告

· 详细记录各校准项目的原始数据、计算结果及合格判定；

· 若某项指标不合格，通过设备软件或硬件调节（如温控补偿参数、光学增益）后重新校准，直至达标；

· 生成校准报告，由授权人员签字存档，注明下次校准时间。

四、注意事项

1. 校准权限：需由经过培训的专业技术人员操作。

2. 软件匹配：校准前确认设备软件为最新版本。

3. 应急处理：若校准后仍存在检测异常，需排查是否为耗材（如反应管、封膜）问题，或联系专业技术人员进行硬件检测。

4. 溯源性要求：校准数据需可追溯，与实验室 LIS 系统或质控记录关联，确保符合 ISO 15189 等质量管理体系要求。